爪蟾卵母细胞的采取方法
2014-12-06 07:51:21
admin
选择近半年内未取过卵母细胞的爪蟾，冰浴 30-45 min，待其四肢麻痹，翻正反射消失后，在其下腹部正中皮肤及内部肌肉处切一个 0.5-1 cm 的小口，拉出宫瓣，剪出试验所需量的爪蟾卵母细胞，置于含 OR2 溶液（41 mmol/L NaCl，1 mmol/L KCl，0.5 mmol/L MgCl2，2.5 mmol/L HEPES）的培养皿中待用，缝合爪蟾的肌肉及皮肤，置于浅水中（注意使其头部露在水面上方），使其自然苏醒。取过卵母细胞的雌性爪蟾在饲养6个月后可以进行第二次取卵，一只成体性成熟雌性爪蟾平均可以取卵3-6次。将培养皿中成串的卵母细胞剪成小块，转移至 50 mL 离心管中反复用 OR2 溶液清洗，至清洗后的 OR2 溶液澄清为止。 将剪成小块并清洗干净的卵母细胞，在含有不同浓度胶原酶的 OR2 溶液中室温下振荡消化后，于 17℃恒温培养箱中培养，分离当天或培养过夜后进行注射。