非洲爪蟾实验用缓冲液与麻醉剂配制Buffers & anesthetic preparation

实验技术Protocol

Steinberg's 溶液

100× 母液成分

成分终浓度(100×)
NaCl580 mM
KCl7.5 mM
Ca(NO₃)₂·4H₂O4 mM
MgSO₄·7H₂O8.36 mM
HEPES500 mM

NaOH 调 pH 7.4±0.1,0.22 μm 过滤灭菌,4 ℃ 保存 ≤3 个月。

1× 工作液

100× 母液 1:100 稀释,加青霉素 100 IU/mL + 链霉素 100 μg/mL,pH 7.4±0.1;用于卵母细胞培养与恢复培养。

MS-222 麻醉液

用途浓度暴露时间
深度麻醉(手术)1 g/L(0.1%)5–10 min,至失去翻正反射
安乐死5 g/L(0.5%)≥60 min

溶于 Steinberg's 液,NaHCO₃ 调 pH 7.0–7.5;4 ℃ 避光保存,有效期 14 天。

MBS-H(改良巴氏液)

10× 母液成分

成分终浓度(10×)
NaCl880 mM
KCl10 mM
NaHCO₃24 mM
HEPES100 mM
MgSO₄·7H₂O8.2 mM
Ca(NO₃)₂·4H₂O4.1 mM
CaCl₂·2H₂O4.1 mM

NaOH 调 pH 7.4±0.05,0.22 μm 过滤灭菌;0.1× 稀释液用于早期胚胎培养。

PBS(磷酸盐缓冲液)

10× 母液成分

成分终浓度(10×)
NaCl1.37 M
KCl27 mM
Na₂HPO₄·12H₂O65 mM
KH₂PO₄15 mM

HCl 或 NaOH 调 pH 7.2±0.05;可高压灭菌(121 ℃,15 min)或 0.22 μm 过滤灭菌。

所有缓冲液 pH 维持在 7.3–7.5;HEPES 缓冲液禁止高温灭菌(>50 ℃ 分解);含 Ca²⁺/Mg²⁺ 成分需分别配制后混合,防止产生沉淀。

参考文献References

  1. Sive HL, Grainger RM, Harland RM (2000) Early Development of Xenopus laevis: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
  2. Goldin AL (1992) Maintenance of Xenopus laevis and oocyte injection. Methods Enzymol 207:266–279.
  3. Gurdon JB (1967) African clawed frogs. In: Wilt FH & Wessells NK (eds), Methods in Developmental Biology. Crowell, New York.
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