爪蟾卵母细胞膜渗透率检测
服务概述
本服务利用非洲爪蟾卵母细胞作为高效异源表达系统,通过精准监测细胞在低渗环境中的体积变化,为客户提供定量的膜透水性评估。该服务是研究水通道蛋白(Aquaporins, AQPs)及其他可能影响膜水渗透性蛋白功能的黄金标准方法。
核心技术原理
将表达目标膜蛋白的卵母细胞置于低渗溶液中,细胞外渗透压的骤降会驱动水分子通过细胞膜向内渗透。通过高倍显微镜实时记录细胞体积的膨胀动力学,可以精确计算出水通透系数(Pf值),从而直接、定量地反映目标蛋白的通水活性。
标准服务流程
样品准备与预处理:
客户提供目标基因的cRNA或由我方承接cRNA制备服务。
我们对处于V-VI期的健康卵母细胞进行标准化显微注射,确保cRNA的准确导入。
将注射后的细胞在适宜条件下培养1-3天,以保证目标膜蛋白的充分表达。
低渗刺激与图像记录:
将表达后的卵母细胞迅速转移至预定的低渗溶液中,引发水分子内流。
使用配备高分辨率相机和高速采集软件的显微系统,以固定时间间隔(如每秒)连续捕获细胞图像,完整记录其膨胀过程。
数据分析与报告生成:
利用专业的图像分析软件,从序列图像中精确提取细胞的投影面积或直径变化数据。
依据标准的水渗透动力学模型,计算每个细胞的水通透系数(Pf值)。
最终提供包含原始数据、分析图表、Pf值统计比较及专业结论的详细检测报告。
服务优势
高灵敏度: 卵母细胞体积大、背景水通透性低,是检测蛋白介导的微弱水通量变化的理想模型。
高特异性: 通过设置未注射组、空载体注射组作为阴性对照,并可利用GFP荧光蛋白进行表达验证,确保检测结果的特异性和可靠性。
定量精准: 提供精确的Pf值,实现不同蛋白功能活性的量化比较与统计学分析。
一站式服务: 支持从基因载体构建、cRNA制备到最终功能检测的全流程服务,确保实验的连贯性与高质量。
客户提供
目标基因的序列信息、质粒或cRNA(若由我方承担制备,则无需提供)。
最终交付
完整的实验报告(含实验方法、原始数据、分析图表与结论)。
实验过程的关键图像或视频记录。
水通透系数(Pf值)的统计分析结果。