爪蟾卵母细胞双电极电压钳(TEVC)检测
服务概述
本服务利用非洲爪蟾卵母细胞这一经典异源表达系统,结合双电极电压钳(TEVC) 技术,为客户提供精准、定量的离子通道功能分析。我们能够系统地表征由目标离子通道产生的电流特性、激活/失活动力学参数,并评估化合物对其功能的调控作用,为离子通道相关的基础研究、药物发现与安全性评价提供关键数据支撑。
核心技术方法与原理
双电极电压钳(TEVC)技术: 该技术是研究卵母细胞表达离子通道的金标准。通过插入细胞内的两个微电极,一个用于精确控制和钳制细胞膜电位(电压电极),另一个用于记录跨膜电流(电流电极),从而在精准控制的电压刺激下,测量离子通道产生的宏观电流。
核心分析维度:
电流-电压关系: 揭示通道的电压依赖性激活特性与反转电位。
动力学参数: 量化通道的激活、失活及失活后恢复的时间常数与电压依赖性。
药理学响应: 检测并定量分析激动剂、拮抗剂或调控分子对通道电流的效价与效能。
标准服务流程
样品准备:
客户提供目标离子通道基因的cRNA或委托我方进行载体构建与cRNA制备。
我方对V-VI期卵母细胞进行标准化显微注射与培养(通常1-4天),确保离子通道蛋白在膜上实现功能性表达。
电生理记录:
系统搭建: 在标准ND96记录槽中固定表达后的卵母细胞,植入电压电极和电流电极,建立稳定的全细胞电压钳制。
Protocol执行: 根据通道类型,施加一系列定制化的电压刺激Protocol(如阶梯电压、斜坡电压、动作电位波形等),以激发并记录通道电流。
药理学测试: 在基线记录稳定后,施加不同浓度的待测化合物,实时观察并记录电流幅度或动力学特性的变化。
数据分析与报告:
对记录的原始电流数据进行电容与线性漏电流扣除。
绘制电流-电压曲线,拟合稳态激活/失活曲线,计算激活/失活动力学参数。
分析化合物引起的电流变化,绘制剂量效应曲线,计算IC50/EC50值。
最终提供包含完整实验流程、代表性原始电流轨迹、数据分析图表、拟合参数及专业结论的详细研究报告。
服务优势
金标准技术: TEVC是研究卵母细胞表达离子通道最经典、最可靠的技术,发表认可度高。
高信噪比与通量: 卵母细胞体积大、膜面积大,可获得信噪比极高的宏观电流,单个细胞即可完成完整的浓度效应研究。
灵活的电刺激设计: 可模拟各种生理或病理性的膜电位变化,全面揭示通道功能特性。
一站式解决方案: 从基因表达、电生理记录到数据分析,提供一体化服务,确保项目连贯性与数据质量。
客户提供
目标离子通道基因的序列信息、质粒或cRNA。
(如涉及药理学测试)待测化合物的结构与理化性质信息。
最终交付
完整的技术报告(含方法、结果、数据分析与结论)。
所有原始数据(电流记录数据文件)。
经分析后的图表(如I-V曲线、G-V曲线、动力学分析图、剂量效应曲线等)。
关键电生理参数的统计分析结果。