爪蟾卵母细胞跨膜转运功能分析
服务概述
本服务以非洲爪蟾卵母细胞为经典模型，为客户提供专业、定量的转运体蛋白功能研究。通过引入13C标记的代谢底物或特异性荧光探针作为报告分子，实现对各类转运体（如营养物质转运体、离子转运体、药物外排泵等）活性的高灵敏度、高精度检测，为功能鉴定与机理研究提供关键数据支撑。
核心技术方法与原理
13C稳定性同位素示踪法
原理： 将表达特定转运体的卵母细胞置于含13C标记底物（如13C-葡萄糖、13C-果糖、13C-氨基酸、13C-核苷）的摄取液中。转运体活性越高，胞内累积的13C标记代谢物越多。通过液相色谱-质谱联用技术精准定量胞内13C标记物的含量，即可直接反映转运体的摄取效率。
优势： 绝对定量、高特异性、能真实反映天然底物的转运过程，适用于代谢流研究。
荧光探针摄取/外排动力学分析
原理： 利用待测转运体的特异性荧光底物或竞争性探针（如BCECF-AM用于pH敏感转运体，Fluo-4用于钙离子转运，或特定药物探针），将其与表达后的卵母细胞共孵育。通过荧光显微镜或酶标仪实时监测胞内荧光强度的变化 kinetics，从而计算出物质转运的速率。
优势： 实时、动态、高通量，尤其适用于转运体抑制剂的快速筛选与动力学分析。
标准服务流程
细胞准备与蛋白表达：
客户提供目标转运体基因的cRNA或委托我方进行载体构建与cRNA制备。
我方对V-VI期卵母细胞进行标准化显微注射与培养，确保转运体蛋白高效表达于细胞膜上。
转运功能检测：
(13C法) 进行定时摄取实验，随后清洗细胞并提取胞内代谢物，进行LC-MS/MS分析。
(荧光法) 在精密控温条件下，使用荧光成像系统或酶标仪实时记录转运过程中的荧光信号变化。
方案定制： 根据客户研究的转运体类型，共同确定采用13C同位素法或荧光探针法，并选定合适的报告分子。
检测执行：
数据分析与报告：
对13C质谱数据进行绝对定量与统计分析；或对荧光动力学曲线进行拟合，计算最大初始速率(Vmax)、米氏常数(Km)等关键参数。
最终提供包含完整实验流程、原始数据、统计分析图表及专业结论的详细研究报告。
服务优势
功能直接体现： 直接测量底物跨膜运输这一核心功能，结果直观可靠。
高灵敏度与低背景： 卵母细胞自身转运背景低，能显著放大由外源表达蛋白介导的功能信号。
方法灵活互补： 提供基于质谱的绝对定量与基于荧光的实时动力学两种黄金标准方法，可根据研究目的灵活选择或相互验证。
一站式解决方案： 支持从基因到功能的完整服务链，确保实验体系的一致性与结果的可重复性。
客户提供
目标转运体基因的序列信息、质粒或cRNA。
最终交付
完整的技术报告（含方法、结果、数据分析与结论）。
所有原始数据（LC-MS/MS原始文件、荧光动力学数据、图像等）。
经统计分析的图表（如摄取速率柱状图、转运动力学曲线、剂量效应曲线等）。